Đánh giá tỷ lệ sống của tế bào bằng kỹ thuật nhuộm tế bào dòng chảy - Bộ y tế 2017
I. NGUYÊN LÝ
Dựa trên nguyên lý kết hợp đặc hiệu của kháng nguyên và kháng thể, sử dùng kháng thể đơn dòng kháng CD45 và chất màu huỳnh quang để phát hiện các tế bào tạo máu. Dùng thuốc thử đặc hiệu (7-AAD) để phân biệt tế bào sống và tế bào chết (những tế bào chết sẽ bắt màu thuốc nhuộm) băng hệ thống đếm tế bào dòng chảy. Qua đó có thể tính tỷ lệ tế bào sống trên một quần thể.
Nguồn gốc quy trình: theo quy trình kỹ thuật của hãng, theo AABB (American Association of Blood Bank).
II. CHỈ ĐỊNH
Tất cả các loại mẫu tế bào tạo máu cần xác định tỷ lệ tế bào sống (tế bào gốc trước, sau xử lý, bảo quản...);
III. CHỐNG CHỈ ĐỊNH
Tế bào gốc không thuộc hệ tạo máu.
IV. THUẬT NGỮ SỬ DỤNG
- 7-AAD (7-aminoactinomycin D): có ái lực mạnh với DNA, đi vào tế bào khi màng tế bào tổn thương hay tế bào chết.
- CD45: Dấu ấn đặc hiệu của tế bào tạo máu.
V. CHUẨN BỊ
1. Người thực hiện
Cán bộ được đào tạo để thực hiện kỹ thuật.
2. Phương tiện - Hóa chất
2.1. Phương tiện
- Hệ thống Flow cytometry;
- Máy trộn mẫu vortex;
- Máy tính và phần mềm phân tích kết quả;
- Micro pipet, đầu côn, ống nghiệm;
- Găng tay, mũ, khẩu trang.
2.2. Hóa chất
- Bộ kít xét nghiệm gồm kháng thể kháng CD45, 7-AAD;
- Dung dịch phá hồng cầu NH4Cl 1X;
- Dung dịch PBS 1X.
3. Mẫu bệnh phẩm
Mẫu tế bào gốc hoặc máu có chống đông EDTA.
VI. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
1. Chuẩn bị mẫu và hóa chất
- Chuẩn bị bộ kit xét nghiệm gồm các kháng thể kháng CD45, 7-AAD;.
- Đếm số lượng bạch cầu của mẫu;
- Dùng dung dịch PBS 1X pha loãng mẫu sao cho số lượng bạch cầu còn khoảng 10-15 G/l;
2. Ủ mẫu với kháng thể
- Hút 100μl mẫu đã pha loãng vào ống nghiệm chạy máy;
- Thêm 20μl kháng thể kháng CD45 (gắn huỳnh quang) vào ống;
- Thêm 20μl 7-AAD vào ống;
- Ủ hỗn hợp trong 20 phút, điều kiện tối, nhiệt độ phòng;
3. Phá hồng cầu
- Dùng nước cất và hóa chất Lysing 10X để pha 2ml dung dịch Lysing 1X;
- Thêm 2ml dung dịch Lysing 1X đã pha vào hỗn hợp đã ủ trong ống nghiệm;
- Tiếp tục ủ trong 10phút, điều kiện tối ở nhiệt độ phòng;
4. Chạy mẫu trên máy Flow
- Mở máy, chọn chương trình chạy phù hợp, nhập các thông số cần thiết;
- Đưa lần lượt các ống nghiệm vào đúng vị trí trong máy;
- Chạy máy.
5. Đọc kết quả
- Chọn quần thể dương tính với CD45 là quần thể tế bào tạo máu;
- Trên cửa sổ 7-AAD, xác định rõ quần thể tế bào âm tính với 7-AAD là quần thể tế bào sống, đọc tỷ lệ tế bào sống ở bảng kết quả.
Hướng dẫn chẩn đoán, điều trị và dự phòng bệnh lao - Bộ y tế 2015
Hướng dẫn chẩn đoán, điều trị và dự phòng bệnh lao - Bộ y tế 2015
Hướng dẫn chẩn đoán và điều trị các bệnh cơ xương khớp - Bộ y tế 2014
Hướng dẫn chẩn đoán và điều trị các bệnh cơ xương khớp - Bộ y tế 2014
Hướng dẫn chẩn đoán, điều trị và dự phòng bệnh lao - Bộ y tế 2015
Ngày càng nhiều phụ nữ, cũng như một số ít nam giới (nhưng số lượng tăng dần) sử dụng thuốc nhuộm tóc. Có lẽ bạn từng nghe những lời đồn thổi về việc thuốc nhuộm tóc gây ung thư? Không ít các nghiên cứu coi thuốc nhuộm tóc như một yếu tố rủi ro có thể dẫn tới nhiều loại bệnh ung thư. Bài viết dưới đây sẽ thảo luận về những điều mà nghiên cứu chỉ ra để chúng ta có thể yên tâm đưa ra quyết định.
Phẫu thuật chuyển lưu dòng tiểu tạo ra một con đường mới để đưa nước tiểu ra khỏi cơ thể sau khi cắt bỏ bàng quang. Có ba loại phẫu thuật chuyển lưu dòng tiểu, hai trong số đó giúp người bệnh kiểm soát thời điểm đi tiểu.
Chuyển lưu dòng tiểu là một thủ thuật được thực hiện phổ biến trong điều trị ung thư bàng quang. Mặc dù thủ thuật này mang lại lợi ích lớn cho người bệnh nhưng cũng dẫn đến nhiều thay đổi trong cuộc sống hàng ngày. Sau khi phẫu thuật chuyển lưu dòng tiểu, người bệnh sẽ cần lưu ý một số điều để đảm bảo sức khỏe tốt và duy trì sinh hoạt bình thường.
Nội soi ngược dòng tán sỏi bằng laser là kỹ thuật kết hợp nội soi niệu quản với tán sỏi bằng laser để xác định vị trí sỏi và loại bỏ sỏi thận nằm trong niệu quản. Đây là một thủ thuật xâm lấn tối thiểu, an toàn và hiệu quả hơn so với phẫu thuật truyền thống.
Câu hỏi: - Thưa bác sĩ, việc sử dụng thuốc nhuộm tóc khi tôi đang mang thai có an toàn cho thai nhi không ạ? Cảm ơn bác sĩ!
- 0 trả lời
- 824 lượt xem
Nâng mũi được 1 thắng nhưng đầu mũi còn to, cứng
- 1 trả lời
- 1543 lượt xem
Năm nay em 25 tuổi, hiện đang có thai lần đầu được 7 tuần. Hai hôm trước em bị sổ mũi nhức đầu nên đã đánh cảm bằng lá na và dầu hỏa. Em vò lá na, tẩm dầu hỏa rồi bôi lên khắp người và lên cả vùng bụng nữa. Khoảng 2 giờ sau, em thấy vùng bụng dưới hơi nóng và đau nhẹ nên đã lấy khăn ẩm lau sạch thì mới hết nóng. Liệu dầu hỏa có thể bị hấp thụ qua da, ảnh hưởng tới sự phát triển của em bé không ạ?
- 1 trả lời
- 598 lượt xem
Bác sĩ ơi, vì không biết mình đã mang thai 4 tuần nên em đã lỡ đi nhuộm tóc mất rồi. Nhuộm tóc một lần như thế thì liệu có ảnh hưởng gì đến em bé không?
- 1 trả lời
- 1003 lượt xem
Bé nhà em khi được 6 tuần 2 ngày tuổi thì tai bị chảy dịch màu vàng nhạt khiến 2 tai bị ửng đỏ lên. Em cho đi khám thì bác sĩ kết luận bị viêm tai giữa và còn bị chàm da nữa. Bác sĩ đã kê thuốc để bôi bên ngoài nhưng nay bé được 8 tuần 3 ngày tuổi thì đã khỏi chàm da, còn trong tai vẫn bị chảy ít dịch. Nếu ko lau thì nó khô lại như ráy tai bên ngoài. Em có thể vệ sinh tai cho bé bằng nước muối sinh lý không ạ? Em cho bé bú trực tiếp hoàn toàn bằng sữa mẹ ạ.
- 1 trả lời
- 996 lượt xem
- Thưa bác sĩ, tôi rất thích ăn giá đỗ. Bác sĩ cho tôi hỏi ăn giá đỗ khi mang thai có an toàn không ạ? Cảm ơn bác sĩ!