ANA 17 profile test (sàng lọc và định danh đồng thời 17 typ kháng thể kháng nhân bằng sắc ký miễn dịch) - Bộ y tế 2017

I. NGUYÊN LÝ

Kháng nguyên (KN) được gắn sẵn trên màng của strip. Các KN kết hợp với kháng thể (KT) đặc hiệu (nếu có) trong huyết thanh người bệnh tạo nên phức hợp KN - KT khi ủ. Sau khi rửa sạch, phức hợp này sẽ được gắn tiếp với KT kháng globulin miễn dịch người (anti IgG) đã kết hợp sẵn enzym peroxidase. Sau khi rửa, lượng enzym gắn với phức hợp này được giữ lại trong giếng. Khi cho cơ chất TMB/ H2O2 enzym sẽ xúc tác tạo phản ứng tạo màu xanh. Sau đó ngừng phản ứng tạo màu bằng nước cất, đọc kết quả.

II. CHỈ ĐỊNH

Các trường hợp ngh đến bệnh t miễn.

III. CHỐNG CHỈ ĐỊNH

Không có chống chỉ định.

IV. CHUẨN BỊ

1. Người thực hiện

• Kỹ thuật viên và cử nh n đã được đào tạo th c hiện k thu t;
• Bác sĩ xét nghiệm: đọc kết quả, đánh giá, kiểm tra chất lượng.

2. Phương tiện - Hóa chất

2.1. Phương tiện

•  Máy ly tâm ống máu;
•  Pipet và đầu côn dùng được cho 10μl, 300 μl, 700μl, 1000μl;
•  Pipet nhựa;
•  Găng tay.

2.2. Hóa chất

•  Dung dịch Wash Buffer 20X (pha thành dung dịch 1X bằng nước cất);
•  Dung dịch đệm mẫu (10ml Wash Buffer 1X + 1 lọ Blocking Reagent);
•  Dung dịch cộng hợp (Conjugates);
•  Cơ chất tạo mầu (TMB substrate);
•  24 strips;
•  24 rãnh ủ;
•  Bảng tham chiếu;
•  Nước cất, hoá chất khử trùng Natri hypoclorite.

3. Mẫu bệnh phẩm

•  Mẫu dùng là huyết thanh.
•  Cần tách huyết thanh càng sớm càng tốt để tránh hiện tượng tan máu làm ảnh hưởng đến kết quả phản ứng.
•  Nếu có lẫn hồng cầu hoặc những thành phần hữu hình trong mẫu huyết thanh th cần ly tâm mẫu để loại bỏ các thành phần đó trước khi xét nghiệm.
•  Mẫu huyết thanh bảo quản ở nhiệt độ 2oC đến 8oC có thể dùng làm x t nghiệm trong vòng 7 ngày. Nếu muốn để lâu hơn mới xét nghiệm cần phải bảo quản ở tủ lạnh sâu (≤ -20oC). Tuy nhiên với mẫu bảo quản lạnh s u cần tránh đông-tan nhiều lần.

V. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

• Đặt strip (Strip cho người bệnh, Strip chứng m, Strip chứng dương) vào rãnh ủ.
• Cho 700μl Wash buffer 1X và 300μl Sample buffer vào rãnh ủ. Làm ẩm strip
• với dung dịch và ủ trong v ng 5 phút, lắc đều.
• Hút 10μl mẫu huyết thanh vào rãnh ủ, trộn đều. Ủ 30 phút ở 20-32oC, lắc đều (5 phút lắc 1lần). Hút b hoàn toàn dung dịch trong rãnh.
• Rửa 1 lần (1x 1,5ml Wash buffer 1X) trong v ng 5 phút, lắc đều. Hút b hoàn toàn dung dịch rửa. Lặp lại bước rửa 2 lần.
• Hút 700 μl Wash buffer 1X và 300 μl Conjugate vào rãnh ủ, lắc đều. Ủ 30 phút ở 20-32oC, lắc đều (5 phút lắc 1 lần). Hút b hoàn toàn dung dịch trong rãnh.
• Rửa 1 lần (1x 1,5ml Wash buffer 1X) trong v ng 5 phút, lắc đều. Hút b hoàn toàn dung dịch rửa. Lặp lại bước rửa 2 lần.
• Hút 700 μl nước cất và 300 μl cơ chất hiện màu vào rãnh ủ, lắc đều. Ủ 15 phút ở 20-32oC, lắc đều (5 phút lắc 1 lần), tránh ánh sáng. Hút b hoàn toàn dung dịch trong rãnh.
• Hút 2 ml dung dịch nước cất vào rãnh ủ. Ủ 1 phút, lắc đều. Hút b hoàn toàn dung dịch trong rãnh. Lặp lại bước này một lần nữa.
• Bỏ strip ra khỏi rãnh ủ. Làm khô strip bằng giấy lọc.
• Phân tích kết quả trong vòng 24h.

VI. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

- Kết quả của test có thể coi là hợp lệ, nếu:

•  Functional control có thể nh n thấy được;
•  Cut-off control có thể nh n thấy được;
•  Cường độ màu sắc của cut-off control yếu hơn so với Functional control;
•  Chứng âm tính, chứng dương tính.

- Đặt strip lên bảng tham chiếu sao cho băng tại vị trí của Functional control, Cut-off control trên strip khớp với băng trên bảng tham chiếu.

- So sánh cường độ màu sắc của các băng với cường độ màu của cut-off control:

•  Nếu cường độ màu sắc mạnh hơn th kết quả x t nghiệm là dương tính;
•  Nếu cường độ màu sắc là yếu hơn th x t nghiệm là m tính.

VII. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

- Sai sót mẫu bệnh phẩm: tên người bệnh trên giấy chỉ định x t nghiệm và trên ống máu không thống nhất, máu bị đông.

• Xử trí: yêu cầu nơi đưa mẫu xác minh lại thông tin trên giấy chỉ định và trên ống nghiệm, nếu cần phải lấy lại mẫu bệnh phẩm.

- Sai sót do nh mẫu vào rãnh không thống nhất thông tin về thứ t người bệnh và thứ t mẫu ph n tích.

• Xử trí: Vẽ sơ đ nh mẫu trước khi làm x t nghiệm. Kiểm tra đối chiếu thông tin vị trí nh mẫu trước khi nh mẫu.

- Chứng dương m tính hoặc chứng m dương tính: Nếu xảy ra hiện tượng này đều không dùng được kết quả của lần x t nghiệm này. Nguyên nh n có thể do hóa chất không đảm bảo chất lượng, do không thực hiện đủ và đúng các bước trong quy trình xét nghiệm, nhiệt độ phản ứng không phù hợp, thực hiện bước rửa kém hiệu quả. Để strip khô trong bước ủ, để ngón tay chạm vào strip, như hóa chất trực tiếp vào strip.

• Xử trí: làm lại xét nghiệm, kiểm tra chỉ dùng hóa chất còn hạn sử dụng và được bảo quản đúng điều kiện theo hướng đãn của nhà sản xuất, tuân thủ đúng các bước quy trình, kiểm soát tốt nhiệt độ phòng xét nghiệm (20-32oC).