Treponema pallidum PCR - Bộ y tế 2018

I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ

1. Mục đích

• Phát hiện sự có m t bộ gen c a Treponema pallidum có trong bệnh phẩm c a người

2. Nguyên lý

• Dựa trên nguyên lý kỹ thuật PCR.

II. CHUẨN BỊ

1. Người thực hiện

•  Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ ho c chứng nhận v chuyên ngành Vi sinh (và/ho c sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).
•  Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đạihọc ho c sau đại học v chuyên ngành Vi sinh (và/ho c sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

2. Phương tiện, hóa chất (Ví dụ hoặc tương đương)

2.1. Trang thiết bị

•  T an toàn sinh học cấp 2
•  Máy nhiệt
•  Máy ly tâm > 12000 gpm/phút
•  Máy ly tâm dùng cho tube 0,2 ml
•  Máy vortex
•  Máy chạy PCR
•  Các loại Micropipette đi u chỉnh được: 1000μl, 200μl, 100μl, 10μl
•  Máy điện di
•  Máy đọc ảnh gel
•  Lò vi sóng
•  T lạnh thường
•  T âm sâu (200C) ho c (-700C) (nếu có)
•  Bộ lưu điện

2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

* Ghi chú: Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).

3. Bệnh phẩm

• Dịch cơ thể nghi ngờ có căn nguyên do Treponema pallidum gây bệnh: Tổn thương loét, đào ban, vết trợt, hạch...

4. Phiếu xét nghiệm

• Đi n đầy đ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu

III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ trên.

1. Lấy bệnh phẩm

• Theo đúng quy định c a chuyên ngành Vi sinh (Xem Phụ lục).

2. Tiến hành kỹ thuật

•  Tách chiết DNA từ bệnh phẩm
•  Pha hỗn hợp phản ứng PCR
•  Chạy phản ứng PCR
•  Điện di sản phẩm PCR
•  Đọc kết quả

IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

•  Phản ứng dương tính khi có sản phẩm PCR là một băng đ c hiệu duy nhất, rõ nét, không bị đứt gẫy và có kích thước tương ứng với đoạn gen đích cần khuếch đại.
•  Phản ứng âm tính nếu không có vạch sản phẩm PCR có kích thước tương ứng với đoạn gen đích cần khuếch đại.

V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

•  Phản ứng dương tính giả: do tạp nhiễm từ môi trường
•  Phản ứng âm tính giả: do phản ứng PCR bị ức chế
•  Để hạn chế các hiện tượng trên phải tuân th ch t chẽ quy trình kỹ thuật.