Treponema pallidum Real-time PCR - Bộ y tế 2018

I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ

1. Mục đích

• Xác định sự có m t c a Treponema pallidum trong dịch sinh dục c a người.

2. Nguyên lý

• Dựa trên nguyên lý kỹ thuật Real-time PCR.

II. CHUẨN BỊ

1. Người thực hiện

•  Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ ho c chứng nhận v chuyên ngành Vi sinh (và/ho c sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).
•  Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại học ho c sau đại học v chuyên ngành Vi sinh (và/ho c sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

2. Phương tiện, hóa chất (Ví dụ hoặc tương đương)

2.1. Trang thiết bị

•  T an toàn sinh học cấp 2
•  Máy nhiệt
•  Máy ly tâm > 12000 gpm/phút
•  Máy ly tâm dùng cho tube 0,2 ml
•  Máy vortex
•  Máy Real-time PCR c a hãng Eppendoft
•  Ống Eppendorf 1,5 ml ho c 2 ml
•  Các loại Micropipette đi u chỉnh được: 1000μl, 200μl, 100μl, 10μl
•  Đầu côn có màng lọc 10 μl, 100 μl, 200 μl và 1000 μl
•  T lạnh thường
•  T âm sâu (200C) ho c (-700C) (nếu có)

2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

* Ghi chú:

•  Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).

3. Bệnh phẩm

• Dịch cơ thể nghi ngờ có căn nguyên do Treponema pallidum gây bệnh: Tổn thương loét, đào ban, vết trợt, hạch...

4. Phiếu xét nghiệm

• Đi n đầy đ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu

III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ trên.

1. Lấy bệnh phẩm

• Theo đúng quy định c a chuyên ngành Vi sinh (Xem phụ lục).

2. Tiến hành kỹ thuật

•  Tách chiết DNA theo hướng dẫn sử dụng c a Kit tách chiết DNA
•  Cho một lượng mẫu DNA tách chiết được vào các ống phản ứng PCR có chứa các thành phần cần thiết c a kit
•  Chạy phản ứng PCR theo chu trình nhiệt thích hợp trên máy Real-time PCR
•  Đọc kết quả

IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

• Bước 1: Kiểm tra chứng âm
• Bước 2: Kiểm tra chứng dương
• Bước 3: Xác định mẫu dương tính với Treponema pallidum
• Bước 4: Xác định mẫu âm tính với Treponema pallidum

V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

•  Phản ứng dương tính giả: do tạp nhiễm từ môi trường
•  Phản ứng âm tính giả: do phản ứng PCR bị ức chế
•  Để hạn chế các hiện tượng trên phải tuân th ch t chẽ quy trình kỹ thuật